mRNA层析纯化：

mRNA体外转录（IVT）副产物dsRNA对mRNA的影响仍在不断探索中，目前大量的证据支持有效去除dsRNA对于mRNA开发的益处。基于dsRNA副产物对mRNA相关研究的负面干扰，科研人员亟需高纯度mRNA用于体内外试验，尤其是用于小鼠等动物模型的体内研究。

相比氯化锂（LiCl）沉淀和磁珠法，层析纯化方案可针对性去除IVT反应混合物中的dsRNA杂质，从而减少其对实验的不良影响。

mRNA纯化方法的比较

纯化方法	氯化锂沉淀法	氯化锂沉淀法 磁珠纯化法	层析法
纯化原理	盐析选择性沉淀RNA	磁珠吸附RNA	亲和层析：polyA与oligo dT特异性结合 离子交换层析：根据电荷差异分离物质
核心操作	离心为主A	磁珠吸附/清洗	清洗-上样-洗杂-洗脱-清洗
操作时间	30-60 min	15-30 min	60 min以上
mRNA纯度	低（含非目标RNA）	较高(去除大部分杂质)	极高（两步层析后mRNA纯度和完整性通常可达95%以上）
应用场景	小批量mRNA的简易纯化 细胞转染（体外研究）		大批量、更高质量mRNA的纯化 动物试验（体内研究）

案例分享

为满足实验人员对高纯度mRNA的需求，青鸟核酸在科研级样品的标准纯化工艺（氯化锂沉淀）基础上增加Oligo dT亲和层析后，能够将mRNA样品中的dsRNA控制在为0.9（0.090 ng/μg）。此外，在Oligo dT亲和层析后增加DEAE离子交换层析或者疏水层析，能够进一步去除21.43%或7.89%的残留dsRNA，mRNA纯度和完整性也达到了95%以上。