T7启动子及相关变体：

mRNA的 5’Cap结构是一种必不可少的修饰，有助于mRNA逃避细胞先天性免疫反应、实现蛋白质翻译。体外转录（IVT）制备mRNA的工艺中，常见的加帽方法包括酶法加帽和共转录加帽。其中共转录加帽在IVT反应的同时就可以完成，能够简化mRNA的工艺流程。

共转录加帽法需在IVT体系中添加帽类似物（Cap Analog）。使用ARCA、CleanCap等不同结构的帽类似物时，需注意其与mRNA转录模板序列的匹配性，具体为T7启动子下游序列。

GG模板：

首先是GG模板，序列为：5’-TAATACGACTCACTATAGGG…-3’。
GG模板来源于III级T7启动子（T7 promoter class III），适用于GG类型的帽类似物，如第一代帽类似物m7G(5’)ppp(5’)G和第二代抗反向帽类似物ARCA（均为Cap 0帽结构）。

AG模板：

其次是AG模板，序列为5’-TAATACGACTCACTATAAGG…-3’。
AG模板是T7启动子的一种变体，目的是适应第三代帽类似物CleanCap AG（m7GpppmApG），即GAG Cap。GAG Cap是目前mRNA制备中最常用的帽类似物，能直接添加Cap 1帽结构。辉瑞/BioNTech开发的新冠mRNA疫苗BNT162b2利用了GAG帽类似物进行共转录加帽。

AT模板：

最后是AT/AU模板，序列为：5’-TAATACGACTCACTATAAT…-3’。
自复制mRNA（saRNA）是一类特殊的mRNA，通常使用一种RNA病毒——甲病毒（alpha病毒）基因组序列作为骨架。这类病毒基因组的5'端起始序列为AU，为保留其天然结构，AT/AU模板得以开发，对应的商业化帽类似物有CleanCap AU。
使用AT模板与对应的帽类似物，得到的mRNA 5’端序列为GAU。根据日本药品监管机构（PMDA）公开信息，首款获批上市的新冠saRNA疫苗ARCT-154（Zapomeran）采用了GAU的帽结构。