Loading...
当前成熟的LNP包封率检测思路为:利用已知浓度的mRNA制作标准曲线(通常为2条标曲,分别适用高浓度范围和低浓度范围),然后设置两组mRNA-LNP样品,一组用来测定总mRNA(利用化学试剂裂解LNP,释放所有的mRNA),一组测定游离mRNA,由此计算得到总mRNA和游离mRNA的含量,进一步计算LNP包封率。
青鸟核酸(RNASci)建立了LNP破乳方法和符合线性关系的mRNA标准曲线,满足LNP包封率分析方法开发与优化、样品检测放行的需求。
测定260 nm吸光值(A260)是核酸定量最常用的分析技术。但由于蛋白质和其他核酸(如RNA中的DNA、DNA中的RNA)对吸光值存在很大的干扰性,导致其检测的灵敏度较低。 使用灵敏的荧光核酸染料可以克服这一缺陷,如RiboGreen。随着mRNA-LNP这一新型纳米药物的发展,RiboGreen逐渐被应用于LNP包封率的检测。多家权威机构发布了mRNA质量相关指导原则。其中美国药典USP与CDE指导原则均建议使用荧光法检测mRNA-LNP的包封率。
基于荧光结合原理,青鸟核酸开发了稳定的包封率检测方法。该分析方法下,针对总mRNA、游离mRNA制作的标准曲线均符合线性关系(R2>99%)。